產品名稱 | 貨號 | 貨期 | 價格 |
CircRNA pull down試劑盒(動物) | FI8710-12T | 現貨 | |
FI8710-24T | 現貨 |
輝駿生物自主研發(fā)的 circRNA pull-down 試劑盒(已獲得國家知識產權局發(fā)明專利授權),利用“F2標簽”與其特異性配體的強親和力,高效調取細胞中的目標cirRNA及其結合蛋白。F2標簽是一段短的RNA序列,與目標circRNA連接后,幾乎不影響其結構和功能。
實驗前先將F2標簽序列與目標circRNA序列連接,構建成F2-circRNA過表達載體,轉染并裂解目的細胞,之后采用特異性配體磁珠來調取F2-circRNA及其結合蛋白。去除未結合的蛋白后,可以采用多種方法洗脫蛋白質。分離的蛋白產物既可以用Western blot檢測已知蛋白,也可以用質譜(LC-MS/MS)鑒定未知蛋白。
蛋白-蛋白間的相互作用是蛋白質發(fā)揮生物學功能的主要模式,蛋白質會通過結合不同的伙伴來行駛不同的功能,形成復雜的信號轉導網絡。以下列舉了可應用pull down試劑盒的幾個研究方向或研究領域:
1. 確定2個蛋白是否具有直接相互作用;
2. 確定蛋白之間結合的結構域;
3. 病毒、細菌等病原體侵染宿主細胞的機制;
4. 酶和底物的作用機制;
5. 蛋白調控復合體的研究。
試劑名稱 | 體積(12 Tests) | 體積(24 Tests) | 保存條件 |
磁珠 | 500 μL | 1 mL | 4 ℃ |
裂解緩沖液 | 7 mL | 14 mL | 4 ℃ |
NT2緩沖液 | 32 mL | 64 mL | 4 ℃ |
RNA結構緩沖液 | 650 μL | 1.3 mL | 4 ℃ |
漂洗液 | 32 mL | 64 mL | 4 ℃ |
洗脫緩沖液 | 650 μL | 1.3 mL | -20 ℃ |
蛋白酶抑制劑 | 230 μL | 460 μL | -20 ℃ |
RNase抑制劑 | 65 μL | 130μL | -20 ℃ |
F2配體 | 250 μL | 500 μL | -20 ℃ |
1、調取效率高:F2標簽序列與F2配體磁珠具有很強親和力,能夠高效調取F2-circRNA及其結合蛋白;
2、不受circRNA接口處序列限制,適用于各種序列的circRNA;
3、F2標簽很短,只有16nt,幾乎不影響目標RNA的結構或功能;
4、洗脫液適配后續(xù)Western Blot及質譜(LC-MS/MS)實驗。
5、操作簡便,耗時短,適用于初學者。
1. 構建F2-circRNA表達載體,轉染目標細胞并進行表達檢測;
2. 裂解樣本,同時制備F2配體磁珠;
3. 將細胞裂解液加入F2配體磁珠中,4 ℃孵育2~4 h;
4. 漂洗、洗脫得到目標蛋白及其互作蛋白復合物。
circrna pulldown WB結果圖(陽性)
circrna pull-down MS:質譜檢索表格(部分展示)
1. A positive feedback between PDIA3P1 and OCT4 promotes the cancer stem cell properties of esophageal squamous cell carcinoma. Cell Communication and Signaling. 2024. IF=8.4.
2. Fumarate induces LncRNA-MIR44352HG to regulate glutamine metabolism remodeling and promote the development of FHdeficient renal cell carcinoma. Cell Death and Disease. 2024. IF=9.2.
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